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克隆感受態_熱激

Stbl2

文字:[大][中][小] 2015-8-26    瀏覽次數:4764    

Stbl2 Chemically Competent Cell 產品說明書




產品規格(CAT#: DL1045)

Stbl2:                                                       100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期):                            -80℃(6個月) 



基因型

F- mcrAΔ(mcrBC-hsdRMS-mrr)recA1 endA1 lon gyrA96 thi supE44 relA1λ-Δ(lac-proAB) 


產品說明

Stbl2菌株來源于 JM109 E. coli strain,適合克隆不穩定插入片段 (正向重復序列,逆轉錄病毒序列等); mcrA突變和mcrBC-hsd RMS-mrr deletion 使該菌株更適于克隆甲基化的基因組序列;同時Stbl2也可用于慢病毒載體的構建。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。不存在lacIqZΔM15,不可用于藍、白斑篩選。Stbl2感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19檢測轉化效率可達109 cfu/μg DNA。


操作方法

1. Stbl2感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質?;蜻B接產物) 并用手撥打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養基(S.O.C.營養豐富,可提高轉化效率)。

4. 37℃,225 rpm復蘇60分鐘或30℃,225 rpm復蘇90分鐘。

(當質粒中含有不穩定片段時,30℃培養可降低錯誤重組的概率,若轉化control pUC19計算轉化效率,則需37℃,225 rpm復蘇60分鐘

5. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的S.O.C.或LB培養基上。

6. 將平板倒置放于37℃或30℃培養箱過夜培養。

(當質粒中含有不穩定片段時,30℃培養可降低錯誤重組的概率,若轉化control pUC19計算轉化效率,則需37℃培養過夜)


注意事項

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質?;蜻B接產物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質?;蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。

4. S.O.C.或LB培養基均可使用,S.O.C.可提高轉化效率20%;實驗人員可選擇在37℃或30℃培養細胞,37℃條件下,菌生長速度加快,有利于提高質粒產量,30℃培養可降低錯誤重組概率。





說明書下載

Stbl2 Chemically Competent Cell 產品說明書



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