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克隆感受態_熱激

DH10B

文字:[大][中][小] 2015-8-26    瀏覽次數:5608    

               DH10B Chemically Competent Cell 產品說明書 




產品規格(CAT#: DL1070)

DH10B:                                                    100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期):                            -80℃(6個月) 


基因型

F- mcrA ?(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZ?M15 ?lacX74 recA1 endA1 araD139 ?(ara, leu)7697 galE15 galK λ- rpsL nupG


產品說明

DH10B菌株來源于MC1061菌株,mcrA、mcrBC及mrr突變使DH10B菌株適合于克隆富含甲基胞嘧啶或甲基腺嘌呤的DNA (Therefore , genomic DNA , both prokaryotic and eukaryotic, can be cloned efficiently in DH10B)。recA1和endA1的突變有利于插入DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。φ80lacZ?M15 marker的存在使DH10B可用于藍白斑篩選,rpsL賦予其鏈霉素抗性。DH10B感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>108cfu/μg DNA。 


操作方法

1. DH10B感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質?;蜻B接產物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2.42水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5.將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。如果進行藍白斑篩選操作,將平板放37℃培養至少13小時。

 

注意事項

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質?;蜻B接產物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質?;蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。





說明書下載

DH10B Chemically Competent Cell 產品說明書



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