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克隆感受態_熱激

HB101

文字:[大][中][小] 2015-8-26    瀏覽次數:4077    

HB101 Chemically Competent Cell 產品說明書 



 

產品規格(CAT#: DL1060)

HB101:                                                     100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                   10μl

保存條件(保質期):                            -80℃(6個月) 



基因型

F- mcrB mrr hsdS20(rB- mB-) recA13 leuB6 ara-14 proA2 lacY1 galK2 xyl-5 mtl-1rpsL20((strR) glnV44λ-


產品說明

HB101菌株是 E. Coli K12菌株和 E. Coli B 菌株的雜合產物(同時也是Stbl3的原始菌株)。recA13突變可有效抑制長片段末端重復區的重組,降低錯誤重組的概率;但不含核酸酶endA1突變,體內核酸酶含量較高,提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液。hsdS20背景使HB101缺失內切酶系統,增強了外源DNA的穩定性和提取質量;此菌株具有鏈霉素抗性;不存在lacIqZΔM15,不可用于藍、白斑篩選。HB101感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19質粒檢測轉化效率>5×108cfu/μg DNA。 


操作方法

1. HB101感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA(質?;蜻B接產物)并用手撥打EP管底輕輕混勻(避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42水浴熱激45秒,迅速放回冰中并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

3.向離心管中加入700 μl不含抗生素的無菌培養基 (2YT或LB),混勻后37℃,200 rpm復蘇60分鐘。

4. 5000 rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的2YT或LB培養基上。

5. 將平板倒置放于37℃培養箱過夜培養。


注意事項

1. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化,插入冰中8鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率。

2. 混入質?;蜻B接產物時應輕柔操作。

3. 轉化高濃度的質?;蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。






說明書下載

HB101 Chemically Competent Cell 產品說明書



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