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克隆感受態_熱激

Stbl3

文字:[大][中][小] 2015-8-26    瀏覽次數:9586    

Stbl3 Chemically Competent Cell 產品說明書 




產品規格(CAT#: DL1046)

Stbl3:                                                              100μl/支

pUC19 (control vector,10pg/μl):                         10μl

保存條件(保質期):                                 -80℃(6個月) 



基因型

F- mcrB mrr hsdS20(rB-, mB-) recA13 supE44 ara-14 galK2 lacY1 proA2 rpsL20 (StrR) xyl-5 λ-leu mtl-1 endA1+


產品說明

Stbl3菌株來源于 HB101 E. coli strain,是慢病毒載體系統推薦使用的菌株?;蚪M含有重組酶recA13突變,可有效抑制長片段末端重復區的重組,降低錯誤重組的概率;但不含核酸酶endA1突變,體內核酸酶含量較高,提取質粒時務必使用質粒提取試劑盒中去蛋白液。此菌株具有鏈霉素抗性,不存在lacIqZΔM15,不可用于藍、白斑篩選。Stbl3感受態細胞經特殊工藝制作,pUC19檢測轉化效率>108cfu/μg DNA。 


操作方法

1. Stbl3感受態細胞從-80℃拿出,迅速插入冰中,5分鐘后待菌塊融化,加入目的DNA (質?;蜻B接產物) 并用手撥打EP管底輕輕混勻 (避免用槍吸打),冰中靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒,迅速放回冰上并靜置2分鐘,晃動會降低轉化效率。

3. 向離心管中加入0.9 mL室溫S.O.C.或LB培養基(S.O.C.營養豐富,可提高轉化效率)。

4. 37℃,225 rpm復蘇60分鐘或30℃,225 rpm復蘇90分鐘。

(當質粒中含有不穩定片段時,30℃培養可降低錯誤重組的概率,若轉化control pUC19計算轉化效率,則需37℃,225 rpm復蘇60分鐘

5. 5000rpm離心一分鐘收菌,留取100 μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應抗生素的S.O.C. 或LB培養基上。

6. 將平板倒置放于37℃或30℃培養箱過夜培養。

(當質粒中含有不穩定片段時,30℃培養可降低錯誤重組的概率,若轉化control pUC19計算轉化效率,則需37℃培養過夜)


注意事項

1. 對不穩定DNA片段的克隆或逆轉錄病毒/慢病毒載體的構建,涂板后平板應在30℃培養,以減少發生錯誤重組的概率。

2. 制備高純度病毒質粒時,應使用新鮮轉化的平板接菌,新鮮菌液提取質粒,菌液不可低溫保存后使用。

3. 對不穩定的克隆或病毒質粒優先以質粒狀態保存,盡量避免將質粒保存在大腸桿菌細胞中。

4. S.O.C.或LB培養基均可使用,S.O.C.可提高轉化效率20%;實驗人員可選擇在37℃或30℃培養細胞,37℃條件下,菌生長速度加快,有利于提高質粒產量,30℃培養可降低錯誤重組概率。

5. 感受態細胞最好在冰中緩慢融化。插入冰中8分鐘內加入目標DNA,不可在冰中放置時間過長,長時間存放會降低轉化效率?;烊肽康腄NA時應輕柔操作。

6. 轉化高濃度的質?;蚋咝实倪B接產物可相應減少最終用于涂板的菌量。




說明書下載

Stbl3 Chemically Competent Cell 產品說明書



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